Part3——Denovo FCS Express6 試用版使用指南-入門篇（中）

1. 手動脫機調(diào)補償及自動調(diào)補償

A. 手動調(diào)補償（一般在僅有樣本管或者自動調(diào)補償后微調(diào)時使用）

打開軟件，插入一個數(shù)據(jù)（示例中為彩點圖），當插入一個圖形后，如需更換數(shù)據(jù)的顯示方式，如想將彩點圖更換為其它圖形（如密度圖等），可選中該圖形，直接按照下述步驟更改。

圈中目的細胞群，拖至空白處形成一個新的圖形，并根據(jù)需要改動橫縱坐標軸的參數(shù)。本示例中以FITC和PE為例，調(diào)節(jié)此兩通道之間的補償。下圖所示，補償未經(jīng)過調(diào)節(jié)，F(xiàn)ITC與PE之間有補償。

此時可以手動調(diào)節(jié)兩通道之間的補償，該數(shù)據(jù)為FITC單管，可用PE-FITC調(diào)節(jié)FITC滲漏到PE通道去的熒光。步驟如下圖所示：

出現(xiàn)補償編輯欄，從PE通道中去除FITC的熒光信號，使PE通道的Mean/Median值與陰性細胞群一致。

點擊OK，則FITC滲漏到PE通道的熒光被扣除。

B. 自動調(diào)補償（需要陰性管及各單陽管）

    打開軟件，按照下述步驟操作。

建立直方圖后，在原本的版面Page 1后面出現(xiàn)Scatter Plot及其它各個單管的Control界面。

接著，在Scatter Plot版面中，將門的位置移至正確的細胞群所在的位置，如下圖所示。

如所示的方形門不能正確的圈出細胞群，可按以下步驟將該門改變?yōu)樽杂尚伍T等。

圈好門之后，選中單管Control版面，按照陰性細胞與陽性細胞的位置調(diào)整Marker門的位置。

依次調(diào)整好各單管Control的Marker門的位置。此處不一一列舉?；氐窖a償界面。此處的3、4適用于使用補償beads調(diào)節(jié)補償?shù)那闆r（由于本次數(shù)據(jù)為細胞，此處不詳細列出，如對此步驟感興趣，可咨詢小達君）

則自動調(diào)補償就完成了。補償矩陣及溢出矩陣就出現(xiàn)在補償欄中。

此時，可點擊保存將此補償下來，以便下次使用?；氐絇age 1，當添加一個未經(jīng)過補償調(diào)節(jié)的數(shù)據(jù)時，將該補償拖過去，則該補償矩陣就被應(yīng)用到數(shù)據(jù)中。

或者通過右鍵-Format-Overlay-Compension將補償應(yīng)用到該數(shù)據(jù)中。如下圖所示：

2. 實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計

選擇右鍵-Statistics，可添加門數(shù)據(jù)及十字門象限數(shù)據(jù)。

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