RNA的“脫磷劑”——RNA 5′ Polyphosphatase

酶是一類極為重要的生物催化劑。之前小達君給大家安利了只針對線性RNA的RNase R（RNaseR——RNase家族的“外貌協(xié)會成員”），今天繼續(xù)給大家介紹另一位RNase家族的“奇葩成員”，它能夠從5′-三磷酸化的RNA依次地移除γ和β磷酸基，簡直就像RNA的“脫磷劑”，可以一層一層地“剝開”RNA的磷~

RNA 5′ Polyphosphatase是Epicentre科學(xué)家發(fā)現(xiàn)的一個Mg2+依賴的磷酸水解酶。該酶能夠從5′-三磷酸化的RNA (如初級RNA轉(zhuǎn)錄本) 依次地移除γ和β磷酸基：

5′ pppN—OH 3′ → 5′ pN—OH 3′ + 2 Pi

帶有5′-雙磷酸化末端的RNAs也可以通過RNA 5′ Polyphosphatase轉(zhuǎn)化成5′-單磷酸酶化的RNA：

5′ ppN—OH 3′ → 5′ pN—OH 3′ + Pi

RNA Polyphosphatase對含有5′帽子(例如, 5′ m7GpppN—OH 3′)或5′單磷酸化末端(5′ pN—OH 3′)的RNA沒有活性。但是NTPs和dNTPs都是該酶的底物，產(chǎn)生相應(yīng)的NMPs和dNMPs + 無機磷:

(d)NTP → (d)NMP + 2Pi 

應(yīng)用

• 將5′三磷酸化的RNA轉(zhuǎn)換成5′單磷酸化的RNA，用于使用T4  RNA Ligase的5′-RNA連接標(biāo)記反應(yīng)；

• 分析RNA的5′末端結(jié)構(gòu)；

• 用于制備RNA底物，后續(xù)可用于Terminator? 5′-磷酸依賴性外切核酸酶的降解反應(yīng)。

產(chǎn)品信息

美國Lucigen公司成立于1998年，提供各類用于分子生物學(xué)相關(guān)產(chǎn)品，可以使研究者成功克隆較難克隆的基因，其在2016年收購了Illumina旗下Epicentre產(chǎn)品線。目前產(chǎn)品類別主要包括：體外轉(zhuǎn)錄、基因克隆（BAC克隆試劑盒）、感受態(tài)細胞（TG1噬菌體文庫構(gòu)建感受態(tài)）、體外擴增、轉(zhuǎn)座子突變、蛋白表達、文庫構(gòu)建等。