GFP融合蛋白免疫沉淀的新選擇——GFP selector

還在用傳統(tǒng)方法進(jìn)行GFP融合蛋白免疫沉淀？那你就是Outman了，來看看IBA Lifesciences的GFP selector，給您提供GFP融合蛋白免疫沉淀的新選擇！

傳統(tǒng)的GFP融合蛋白免疫沉淀是基于與GFP特異性抗體非共價(jià)鏈接的protein A或protein G結(jié)合在固相，從而拉下蛋白的原理（見圖1 A），其產(chǎn)率和效率通常受限于一抗的特異性和固相上protein A/G的結(jié)合能力。通常，在用SDS緩沖液洗脫時(shí)，抗體發(fā)生變性并與GFP融合蛋白及相互作用的配體一起從樹脂上分離下來。因此，洗脫液中通常含大量一抗重鏈和輕鏈（見圖1 B），妨礙鑒定蛋白的相互作用，還有可能影響下游實(shí)驗(yàn)，比如蛋白質(zhì)印跡或質(zhì)譜分析。

GFP selector是一種新穎的高品質(zhì)樹脂，用于高效、可重復(fù)的GFP融合蛋白免疫沉淀。GFP selector含單域抗體(single-domain antibody,sdAb)，可識別GFP及其衍生物，具有高特異性和pmol級親和力。重要的是，GFP融合蛋白可以從GFP selector洗脫而不被抗體重鏈或輕鏈污染（見圖1 C），因此可以輕易地鑒定與GFP融合蛋白特異性結(jié)合的蛋白。

△圖1

GFP selector與傳統(tǒng)GFP免疫沉淀的比較：

• 傳統(tǒng)免疫沉淀法使用與protein A偶聯(lián)的GFP特異性抗體，結(jié)合GFP蛋白；

• 傳統(tǒng)法在洗脫時(shí)，抗體輕鏈和重鏈與抗原一起從樹脂中洗脫；

• 由于GFP特異單域抗體與固相的共價(jià)穩(wěn)定連接，結(jié)合的GFP融合蛋白從GFP selector被洗脫時(shí)不會有抗體重鏈或輕鏈污染。

GFP selector也能結(jié)合更高容量的GFP融合蛋白（每μl樹脂結(jié)合>4μg GFP，見圖2 A）。與競爭產(chǎn)品比較，只有GFP selector能夠結(jié)合含GFP的HeLa裂解物中所有靶蛋白（見圖3），因此，它明顯優(yōu)于競爭產(chǎn)品和傳統(tǒng)基于protein G的方法。

△圖2

GFP selector具有高容量和高特異性：

• 將GFP Selector和競爭產(chǎn)品與飽和的重組GFP蛋白孵育，通過SDS-PAGE和考馬斯染色分析1μl樹脂的容量；

• 將相同體積的GFP selector和競爭產(chǎn)品分別與不含任何GFP標(biāo)記蛋白的HeLa裂解物一起孵育，洗滌后，產(chǎn)物通過SDS-PAGE分離并進(jìn)行銀染色分析。

注：與競爭產(chǎn)品相比，GFP selector背景信號弱

△圖3

GFP selector與競爭產(chǎn)品的免疫沉淀結(jié)果：

• 將等量GFP Selector和競爭產(chǎn)品與1ml含GFP標(biāo)記蛋白的HeLa裂解物一起孵育，通過考馬斯染色和蛋白印跡分析上樣、洗滌產(chǎn)物、洗脫產(chǎn)物。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

• 高特異性：識別GFP，mEGFP，sfGFP，Emerald GFP及最常見的CFP和YFP變體，不與mCherry，mRFP，dsRed，mTagBFP及其衍生物發(fā)生交叉反應(yīng)；

• 高容量：每μl樹脂結(jié)合>4μg GFP；

• 應(yīng)用：推薦用于免疫沉淀、質(zhì)譜。

此外，IBA還提供其他融合標(biāo)簽免疫沉淀試劑盒：

IBA lifesciences（德國）：IBA公司總部位于德國。二十年來，IBA以杰出的專利技術(shù)Strep-tag?系統(tǒng)為基礎(chǔ)，發(fā)展出完整的產(chǎn)品組合，涵蓋重組蛋白表達(dá)、純化與固定以及特定細(xì)胞從全血或相關(guān)體液中分離的技術(shù)。同時(shí)，IBA也是全球領(lǐng)先的核酸合成專家，在DNA及RNA寡核苷酸的合成上已有超過二十年的經(jīng)驗(yàn)，能根據(jù)客戶的選擇，生產(chǎn)含有特定染料或化學(xué)修飾的特殊寡核苷酸。