單細(xì)胞水平如何進(jìn)行基因表達(dá)分析？

基因表達(dá) (gene expression) 是指細(xì)胞在生命過(guò)程中，把儲(chǔ)存在DNA中的遺傳信息經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子（或RNA分子）。很多疾病的發(fā)生發(fā)展、很多藥物的作用機(jī)理、很多生物的代謝調(diào)控作用等都和基因表達(dá)的變化有關(guān)，因此對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行分析十分重要。由于基因表達(dá)是在單個(gè)細(xì)胞水平進(jìn)行調(diào)控，所以需要用多種方法來(lái)分析單個(gè)細(xì)胞如干細(xì)胞、神經(jīng)元、發(fā)育組織、激光捕獲切片的基因表達(dá)方式。

為了便于研究單細(xì)胞的基因表達(dá)，美國(guó)Signosis公司開(kāi)發(fā)出一種基于SYBR Green的單細(xì)胞實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑，該試劑可以使用細(xì)胞裂解液直接檢測(cè)基因表達(dá)水平，無(wú)需RNA制備過(guò)程。

* SYBR Green是廣泛用于雙鏈DNA的特異性染料，常用作實(shí)時(shí)熒光定量PCR報(bào)告染料。

小編說(shuō)了半天，下面正式Pick出今日介紹的主角：

與其他定量試劑盒相比，Signosis的試劑盒原理是什么？不同之處？?jī)?yōu)點(diǎn)是？

1）試劑盒包括cDNA合成和PCR擴(kuò)增的所有試劑：

2）您只需要準(zhǔn)備：目的基因特異性引物

3）不同之處在于：無(wú)需額外制備/提取細(xì)胞RNA

4）原理圖：

圖1 試劑盒原理：細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞后直接進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄及隨后的 PCR分析。 

5）結(jié)果展示：

圖2  A: 比較Signosis與其他品牌的細(xì)胞裂解液。分別對(duì)裂解產(chǎn)物中的β-actin進(jìn)行30個(gè)循環(huán)反轉(zhuǎn)錄PCR。 

B: 基因組DNA污染檢測(cè)。Lane1：細(xì)胞裂解產(chǎn)物不經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄直接對(duì)β-actin進(jìn)行36個(gè)循環(huán)PCR擴(kuò)增；Lane2：細(xì)胞裂解液反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA后對(duì)β-actin進(jìn)行36個(gè)循環(huán)PCR擴(kuò)增。 

圖3 細(xì)胞裂解產(chǎn)物中檢測(cè)靶基因。

隨著HeLa細(xì)胞數(shù)的增加，分別用適量細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，而后在7700 PCR儀上進(jìn)行Actin、GAPDH和B2M基因的3復(fù)孔qPCR反應(yīng)。 

6）產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：

7）FAQs：

a. 細(xì)胞裂解液能使用幾次？

每個(gè)試劑盒里包含1mL的細(xì)胞裂解液：

b. 有沒(méi)有儀器要求？

兼容SYBR Green的PCR儀。

更多信息請(qǐng)點(diǎn)擊Signosis官網(wǎng)

www.signosisinc.com