簡單快速獲得多形核粒細(xì)胞(PMNs)的方法

多形核粒細(xì)胞(PMNs)，主要是中性粒細(xì)胞，同時包括少量嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞。

PMNs是血液循環(huán)中最豐富的白細(xì)胞，是對組織損傷和感染的第一反應(yīng)細(xì)胞。在絕大多數(shù)情況下，面對病菌入侵PMN都能做出適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)，以保持體內(nèi)平衡和機(jī)體健康。PMNs的浮力密度往往比單核細(xì)胞大得多（>1.085 g/ml），但是在利用分離液分離的過程中會遇到一個問題，就是紅細(xì)胞的浮力密度往往在1.09 - 1.11 g/ml之間，這使得使用密度分離液從全血中分離PMNs變的很困難。

Serumwerk Bernburg AG 生產(chǎn)的Polymorphprep分離液的高滲透壓可使紅細(xì)胞失水而縮小，從而增大紅細(xì)胞的有效浮力密度，同時分離液中的葡蔗糖能促使紅細(xì)胞聚集并在溶液中快速沉降，隨著離心過程紅細(xì)胞會被逐漸沉降到底部，所以利用Polymorphprep分離液可以快速有效的獲得PMNs。

紅細(xì)胞在Polymorphprep中分離的過程

多形核粒細(xì)胞分離操作步驟：

1、血液樣本的制備。

為了達(dá)到最好的效果，使用抗凝全血，如EDTA，肝素或檸檬酸。EDTA 抗凝效果最佳。

2、將5毫升血液+ 5毫升分離液放入15毫升試管中，下層是分離液上層是血液。

3、500-550g離心30分鐘，溫度在18°C-22°C（允許轉(zhuǎn)子在沒有剎車的情況下減速）

4、離心后，可以看到兩圈白膜層。上面PBMCs,下層是PMNs, 小心吸取PMN。

為使PMNs恢復(fù)正常滲透壓，應(yīng)加入1體積的0.45% NaCl溶液或0.5體積正常濃度的培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋。如需進(jìn)一步稀釋，可使用生理鹽水或培養(yǎng)基。

5 、將細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到一個15ml的試管中，加入2ml PBS, 400 g離心10分鐘(18-22°C)，也可以被重懸在培養(yǎng)基中完成后續(xù)實驗。

注意事項：

1、該分離液僅適用于人的未作稀釋的血液，不適用于動物血液。

2、建議使用兩小時內(nèi)的新鮮血液，待分離血液和待用分離液的溫度需要保持在18度-22度之間。

3、注意離心時間越長或離心力越大，會導(dǎo)致PMN進(jìn)一步向紅細(xì)胞處遷移。

4、這里使用15ml離心管，推薦用5 ml血液+ 5 ml分離液進(jìn)行密度梯度離心，若使用50ml離心管，建議使用 18 ml 血液+18 ml Polymorphprep?。

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參考文獻(xiàn)：

1.https://diagnostic.serumwerk.com/products/polymorphprep/

2.Noah Fine ¹, Nikola Tasevski ¹ The Neutrophil: Constant Defender and First Responder Front Immunol  2020 Sep 24;11:571085.  doi: 10.3389/fimmu.2020.571085.