基因編輯其實(shí)不難 ——來(lái)自U Michigan和Cornell華人學(xué)者的新研究

很多小伙伴應(yīng)該躍躍欲試，想用這個(gè)結(jié)合CRISPR/Cas9 RNP和同源重組的方法來(lái)高效進(jìn)行基因編輯吧？但是根據(jù)新聞介紹，作者花了一年多時(shí)間，進(jìn)行了1000多個(gè)電轉(zhuǎn)樣品的測(cè)試才掌握了電轉(zhuǎn)的合適條件。這又讓人感覺(jué)這個(gè)方法難度不小，即使在論文指引下，想要在自己實(shí)驗(yàn)室消化吸收怎么也得花不少力氣吧？

昨天另一篇來(lái)自密歇根大學(xué)和康奈爾大學(xué)的論文展示了一種新的電轉(zhuǎn)方法，該方法結(jié)合同源重組可以大大提高基因編輯的效率。

文章的共同通訊作者為密西根大學(xué)的徐捷教授和康奈爾大學(xué)的夏曉峰教授。這篇文章和Marson組文章的共同點(diǎn)是都使用電轉(zhuǎn)Cas9RNP的方法在一些之前認(rèn)為很難編輯的細(xì)胞上取得了很高的同源重組效率。Marson實(shí)驗(yàn)室的研究更加深入，在免疫治療上幾個(gè)重要的基因位點(diǎn)做了基因編輯的研究，不僅對(duì)于CAR-T可能有很大幫助，對(duì)于TCR-T的制備可能也有重要意義。

徐、夏兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室主要從事干細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型研究，因此對(duì)于基因編輯主要著眼在方法學(xué)上，力爭(zhēng)使基因編輯高效并且簡(jiǎn)單，可以普遍性地應(yīng)用于各種細(xì)胞上。相比于Marson組的文章，徐、夏這篇文章還報(bào)道了在除了T細(xì)胞之外的多種細(xì)胞包括iPSC干細(xì)胞，MSC間充質(zhì)干細(xì)胞，以及一些細(xì)胞系上取得的良好效果。

對(duì)比文章可以看到，Marson實(shí)驗(yàn)室的電轉(zhuǎn)條件摸索花了很多時(shí)間，他們用的電轉(zhuǎn)系統(tǒng)是Amaxa Nucleofector。這篇Scientific Reports的文章則使用的是一種新的電轉(zhuǎn)系統(tǒng)——Celetrix電轉(zhuǎn)系統(tǒng)，在和Nucleofector的直接對(duì)比試驗(yàn)中表現(xiàn)出更好的性能，包括細(xì)胞成活率和轉(zhuǎn)染效率。值得一提的是，Celetrix電轉(zhuǎn)系統(tǒng)由華人科學(xué)家陳劍發(fā)明，他也是該文的作者之一。

看過(guò)這兩篇文章，小伙伴們是不是也感覺(jué)使用高效的電轉(zhuǎn)系統(tǒng)，在多種細(xì)胞包括和免疫治療直接相關(guān)的T細(xì)胞中的基因編輯并不是一件困難的事情了呢？小伙伴們，大膽地去做自己的設(shè)計(jì)吧！

Celetrix電轉(zhuǎn)系統(tǒng)被稱之為第三代電轉(zhuǎn)技術(shù)，采用獨(dú)特的加壓電擊管替代傳統(tǒng)U型電擊杯的設(shè)計(jì)，奠定了它具有更高電轉(zhuǎn)效率和更高細(xì)胞存活率的基礎(chǔ)原理的優(yōu)越性，另外為輕松實(shí)現(xiàn)大容量細(xì)胞電轉(zhuǎn)成為現(xiàn)實(shí)。

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