NanoTag Biotechnologies,2015年在哥廷根成立,專注于生產(chǎn)生化和熒光應(yīng)用的單域抗體(納米抗體/VHH抗體)和試劑??煞€(wěn)定提供熒光標(biāo)記的單域抗體,新型標(biāo)簽“ALFA”單域抗體及其純化系統(tǒng),用于IP的Selector resins,以滿足各種實(shí)驗(yàn)的要求。納米抗體特別適用于高分辨率顯微鏡成像。
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1、FluoTag —— 帶熒光標(biāo)簽的單域抗體,每個單域抗體可偶聯(lián)1個,2個或4個熒光標(biāo)簽,用于高分辨率顯微鏡成像。
COS 細(xì)胞線粒體表達(dá)標(biāo)記物Tom70-mNeonGreen。使用FluoTag-X2 anti-mNeonGreen AbberiorSTAR RED (紫)對細(xì)胞進(jìn)行染色,細(xì)胞核用 DAPI(藍(lán))染色。
2、新型標(biāo)簽 —— ALFA系統(tǒng)
ALFA 標(biāo)簽是一種新型、合理設(shè)計的表位標(biāo)簽 (SRLEEELRRRLTE),它形成一個小而穩(wěn)定的α-螺旋,無論其在原核和真核宿主中的靶蛋白上的位置如何,該螺旋都具有功能。側(cè)翼脯氨酸殘基不是識別序列的一部分,但可能有助于標(biāo)簽與目標(biāo)蛋白質(zhì)的空間分離。
2.1 用于成像的ALFA系統(tǒng):
Nanotag開發(fā)了一種以 ~26 pM 親和力結(jié)合 ALFA 標(biāo)簽的單域抗體,它不僅非常適合超分辨率顯微鏡、免疫沉淀和蛋白質(zhì)印跡,而且還可以檢測活細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。這種納米抗體幾乎可以與所有種類的熒光團(tuán)、酶或其他生物分子結(jié)合。
2.2 用于免疫沉淀的ALFA系統(tǒng):
ALFA Selector ST:可在酸性或變性條件下洗脫,為高效下拉ALFA標(biāo)記的目標(biāo)蛋白而設(shè)計。
ALFA Selector PE:針對勝利條件下的洗脫進(jìn)行優(yōu)化。
將在 PBS 中制備的 HeLa 裂解物與重組純化的 ALFA 標(biāo)記的 GFP 底物(右泳道)混合。裂解物/底物混合物與 ALFA SelectorPE(左圖)或 ALFA SelectorST(右圖)一起孵育。用 PBS 洗滌后,結(jié)合的蛋白質(zhì)用 200 μM ALFA 肽、甘氨酸 pH2.2 或 SDS 樣品緩沖液 (SDS) 洗脫。使用 ALFA SelectorPE 時,天然條件下的肽洗脫是有效的。通過用甘氨酸或 SDS 樣品緩沖液洗脫,可以從兩種 ALFA Selector 樹脂中回收目標(biāo)蛋白。
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